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抗體稀釋液和ELISA相關溶液的配制
  • 發(fā)布日期:2010-02-21      瀏覽次數(shù):4744
    • 上海聯(lián)碩生物科技有限公司

      抗體稀釋液和ELISA相關溶液的配制

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      1、抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2PBS
        

       NaH2PO4·2H2O

      0.39克

      Na2HPO4

      1.27克

      NaCl

      0.85克

      NaN3

      200mg

      H2O(蒸餾水)

      至    1000ml

      2、ELISA洗液及HRP標記抗體稀釋液PH7.4,PBST 

      NaCl

      2.0克

      KH2PO4

      0.2克

      Na2HPO4·12H2O

      2.9克

      KCl

      0.2克

      NaN3

      0.2克

      H2O

      至    1000ml

      吐溫(Tween)20

      0.5ml

        4°C保存?zhèn)溆?/font>

      3、包被液(簡稱CB)pH9.6  

      Na2CO3

      1.59克

      NaHCO3

      2.93克

      NaN3

      0.2克

      H2O

      至    1000ml

        密封蓋好,4°C存放備用

      4、ELISA底物液(可溶性底物)
        

      磷酸-檸檬酸緩沖液pH5.0

       

      0.1mol/L檸檬酸(21.014克/100ml)

      24.3ml

      0.2mol/L Na2 HPO4(28.4克/1000ml)

      25.7ml

      H2O

      50ml

        4°C存放備用

      5、DAB底物液(不溶性底物,組化病理等)
        

      0.05mol/L pH7.6  Tris-HCL

       

      Tris

      6.05克

      HCL(36%)

      3.15克(約2.7ml濃HCL)

      H2O

      至                            1000ml

      DAB為3´,3´二氧基聯(lián)苯胺,不溶性底物,呈棕紅色

      6、DAB溶液配制:(組化及Western blot 顯色)
       稱DAB30mg,用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL緩沖液100ml溶解,如有沉淀,過濾后使用,一般新鮮配制使用。用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2濃度為0.01%,混均后使用。 7、3´,3´,5´,5´,-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液配制:
       用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或無水乙醇,將TMB配成1%濃度,4°C保存半年以內(nèi)使用。使用前,用pH5.0磷酸-檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1%TMB液,再按每毫升TMB加入30%的H2O2 1ul,混勻后立即使用。2N H2SO4終止后,450nm測定OD值。 

      8、1%離子瓊脂膠配制液
          作免疫雙相擴散,單相擴散及免疫電泳中使用。
         0.05UpH8.6巴比妥鈉-HCL緩沖液  

      巴比妥鈉

      23.8克

      1mol/L HCL

      34.5ml

      H2O

      2150ml


      窗體底端

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