蛋白酶是水解蛋白質(zhì)肽鏈的一類(lèi)酶的總稱(chēng)。按其降解多肽的方式分成內(nèi)肽酶和端肽酶兩類(lèi)。前者可把大分子量的多肽鏈從中間切斷，形成分子量較小的朊和胨；后者又可分為羧肽酶和氨肽酶，它們分別從多肽的游離羧基末端或游離氨基末端逐一將肽鏈水解生成氨基酸。
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時(shí)，胰酶溶液的作用能力強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。
1. 稱(chēng)取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內(nèi)過(guò)夜。
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器( 0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌。然后分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。
胰蛋白酶能夠催化蛋白質(zhì)的特定肽鍵水解，這個(gè)催化過(guò)程是不需要能量的，不會(huì)使酶失去活力，也不會(huì)改變形狀和使自身水解。底物與酶的活性中心的結(jié)合是可逆的，這種結(jié)合使得蛋白質(zhì)特定肽鍵因彎曲變形而被活化，更易于受到水分子的攻擊，分別形成氨基和羧基而斷裂，得到小分子多肽或氨基酸。不同的蛋白酶可以作用在不同氨基酸相連組成的肽鍵，因此胰蛋白酶并不能作用在所有的肽鍵。
